近期,我校生物工程学院糖化学与生物技术教育部重点实验室中西秀树教授团队李子杰副教授课题组在酿酒酵母孢子表面双酶自组装共展示体系的建立及应用方面取得重要进展,研究成果“Development of a self-assembled dual-enzyme co-display platform on the surface of the natural "chitosan beads" of yeast spores”正式发表于International Journal of Biological Macromolecules (中科院一区、Top期刊,IF = 7.7) (https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2024.138308)。
在饥饿条件下,酿酒酵母二倍体细胞进行减数分裂,产生四个单倍体休眠细胞-孢子。孢子壁由四层结构构成,从内到外依次为甘露聚糖、β-葡聚糖、壳聚糖和二酪氨酸。当参与组装孢子壁最外层二酪氨酸的DIT1基因被敲除后,酵母孢子壁的壳聚糖层会暴露在最外面,形成天然的孢子“壳聚糖球”。在前期研究中建立了一种新型的基于壳聚糖亲和蛋白的孢子表面展示系统。本研究在此基础上,构建了酵母孢子“壳聚糖球”表面双酶自组装共展示体系,并应用于塑料聚对苯二甲酸乙二醇酯PET水解酶的自组装共展示。
首先以绿色荧光蛋白GFP和红色荧光蛋白RFP作为模式蛋白,利用壳聚糖亲和蛋白CAP以及生物分子支架SpyCatcher/SpyTag,成功构建孢子表面自组装双酶共展示体系。为证明该体系的实用性,以两种PET水解酶FAST-PETase(FPETase)和MHETase作为模式酶,实现了其在孢子表面的自组装。在孢子表面自组装的PETase和MHETase表现出良好的热稳定性(在30-70℃孵育12 h后,活性保留初始活性的85%)和pH耐受性(在pH 5.0 ~ 9.0孵育12 h后,活性保留初始活性的80%)。与未组装酶相比,组装酶对双-2-(羟乙基)对苯二甲酸酯(BHET)表现出更高的活性,可在1 h内完全降解2 mM的BHET。本研究为多酶催化的反应提供了可靠且高效的细胞表面展示方法,且酿酒酵母孢子“壳聚糖球”双酶自组装表面共展示体系表现出的优良稳定性及抗逆性,为长期酶催化反应在实际中的应用提供了新的平台。
李子杰副教授为论文通讯作者,我校2021级硕士研究生白佳文为第一作者。上述研究得到了国家自然科学基金(32171475)等项目资助。
近年来李子杰课题组在酵母(孢子)表达系统及其应用方面取得了丰硕成果,相关研究发表在International Journal of Biological Macromolecules (2025, 2024)、Journal of Agricultural and Food Chemistry (2022、2020、2019)、Journal of the Science of Food and Agriculture (2024)、ACS Catalysis (2022) 、Biotechnology Journal (2023)、微生物学报(2022)等本领域权威期刊。